天津市浩铭化工有限公司为您免费提供天津乙二醇,天津进口乙二醇,天津丙二醇供应商等相关信息发布和资讯展示,敬请关注!
全国免费咨询热线
022-22118085
新闻中心
    未找到列 [pid]。
    天津市浩铭化工有限公司
  • 联系:
  • 电话:022-22118085
  • 手机:022-22118085
  • 传真:022-22118086
  • 邮箱:574643336@qq.com
  • 网址:www.tjhmhg.com
  • 地址:天津市武清区华德广场B座607

大豆甙元士锋磷酸钙细胞转染技术

来源:http://www.tjhmhg.com/news295472.html发布时间:2017/7/20 0:00:00

[实验目的]
1 了解细胞转染技术原理和大豆甙元基本方法
2 磷酸钙沉淀法的基本技术要点
[实验原理]
磷酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法,磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞,被转染的DNA可以整合到靶细胞的染色体中从而产生有不同基因型和表型的稳定克隆。这种方法首先由Graham和van der Ebb使用,后由Wigler修改而成。可广泛用于转染许多不同类型的细胞,不但适用于短暂表达,也可生成稳定的转化产物。
1 呈指数生长的真核细胞(如HeLa,BALB/c 3T3,NIH 3T3,CHO,或鼠胚胎成纤维细胞)
2 完全培养液(依所用的细胞系而定)
3 CsCl纯化的质粒dna (10~50μg/次转染,二次纯化)
4 2×HEPES缓冲盐水(HeBS)
(pH6.95~7.05) 50.0mmol/L HePes;280mmol/L NaCl;10mmol/L KCl;1.5mmol/L葡萄糖。用0.5mmol/L NaOH调pH至6.95~7.05,过滤除菌后,-20℃保存备用。
5 2.5mol/L CaCl2过滤除菌,-20℃保存备用。
6 磷酸缓冲盐水(PBS)
7 37℃,5%CO2的加湿培养箱
8 100mm组织培养平板

9 15ml锥形管

相关新闻RELATED NEWS
相关产品RELATED PRODUCT